反相色谱分离纯化后,怎样除去流动相产品中的TFA和乙腈或其他杂质?
TFA是反相色谱分离中常用的添加剂。可以用冻干的办法去除,国外许多文献是这样报道的。还可以试试离子交换、凝胶层析、甚至透析和超滤,其中,离子交换层析效果比较好,还可以起到浓缩样品的作用。
首先,冻干的办法应该可以几乎完全地除去TFA和乙腈,药品实验前尽量先检测一下冻干品中的残留量,只要不超过允许范围,这种办法是很简单、有效的。
其次,如果你的药品的分装量不大的话(lt;100ug),建议你用离子交换层析,尽量装一个小一点儿的柱子,让含盐洗脱峰的蛋白浓度达10mg/mL以上,液相色谱仪哪家便宜,稀释后完全符合试验要求。如果用分子筛,考虑稀释,液相色谱仪,尽量也先过一个离子交换。此外可以试试疏水层析。如果产品是碱的话,液相色谱仪哪个稳定性好,可能会形成TFA盐,这样通过上述方法就无法除去。一般可以用碱水洗,液相色谱仪哪家质量好,然后将产品萃取出来。或者在里面加入一定量的盐酸,再干燥后形成盐酸盐。
色谱柱大小
与气体相比,液体的密度和粘度更高,因此HPLC色谱柱通常较短且较宽。典型尺寸为10或25厘米,φ为0.46。
但是更大的色谱柱也已用于制备规模的应用,比如φ10、20、30的液相制备色谱柱。
恒谱生有各种直径大小的分析、制备液相色谱柱可供选择,柱管由316L不锈钢制成,不锈钢柱内壁多经过抛光,减小管壁效应,提高柱效的同时还能做到平衡时间短,高流速,低背压,缩短分析时间,节约溶剂,降低成本。
另一方面,由于气体密度较小且粘度较低,因此GC中建议使用更长的内径较窄的色谱柱。毛细管柱的长度可以达到几米。
工业制备色谱
工业色谱又称制备色谱。利少{J组分的差速迁移而实现I.业规模混合物分离的方法它包括一个流动相(被分离的气相或液相)和一个固定相。两相在色谱柱r},进行接触,在色谱柱‘l,流动相沿固定相流动,由」几混合物中各组分被固定相滞流程度不同,它们随流动相移动的速度就不同,因而可使各组分.4.相分离。根据流动相的不}.可,可分为}L相色谱与液相色谱两类。根据固定相的类型,可分为吸附色谱、分配色iH离子交换色谱、亲和色潜‘排I}}L色谱五类。上业色谱可分离选择性系数非常接近的组分,它适用于热敏N}物质的分离,对制备高纯物质特别有效
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